De dónde provienen las células y los exosomas: obtención, aislamiento y qué revela el método

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Dos viales pueden llevar la misma etiqueta y, aun así, ser muy diferentes. La diferencia suele comenzar mucho antes de llegar al vial: en el tejido del que proceden las células, la forma en que se examinó al donante y el método utilizado para separar los exosomas del resto del líquido de cultivo.
Esta guía explica de dónde proceden las células y los exosomas de grado de investigación, cómo funciona el aislamiento y qué revela cada elección sobre un producto. Su finalidad es educativa y no ofrece consejos médicos. La evidencia clínica en humanos para muchas aplicaciones de células y exosomas sigue siendo limitada.

Por qué importan la obtención y el aislamiento

Las células y los exosomas son materiales biológicos, por lo que varían mucho más que una sustancia química sintética. Pequeños cambios en el tejido de origen, las condiciones de cultivo o el procesamiento pueden modificar lo que acaba en el producto final.
Tres puntos explican por qué los investigadores y proveedores preguntan por el origen:
  • El origen afecta a la biología. Las células de distintos tejidos presentan diferentes tasas de crecimiento, marcadores de superficie y productos secretados.
  • El método afecta a la pureza. Dos técnicas de aislamiento pueden producir preparaciones con recuentos de partículas y perfiles de contaminantes muy diferentes.
  • La documentación influye en la confianza. Sin registros de los lotes, un comprador no puede evaluar la uniformidad de un lote a otro.

De dónde proceden las células para investigación

Fuentes habituales de tejido

Las células estromales mesenquimales (MSC) se describieron por primera vez en la médula ósea y, desde entonces, se han aislado de otros tejidos. Entre las fuentes habituales se incluyen:

  • Médula ósea: históricamente, la fuente más estudiada.
  • Tejido adiposo (grasa): más fácil de recolectar en volúmenes mayores.
  • Tejido del cordón umbilical: incluida la gelatina de Wharton, la matriz gelatinosa que rodea los vasos sanguíneos del cordón.
  • Sangre del cordón umbilical: una fuente independiente con sus propias poblaciones celulares.
La gelatina de Wharton ha despertado interés en la investigación porque el tejido se recoge después del nacimiento y sus células pueden expandirse en cultivo [1]. Cada fuente presenta ventajas y desventajas en cuanto al rendimiento celular, los efectos de la edad del donante y la logística de recolección; no se ha demostrado que una única fuente sea superior para todos los fines.

¿Qué son las células MUSE?

Las células resistentes al estrés y con capacidad de diferenciación multilinaje (MUSE) son una pequeña subpoblación descrita dentro de las poblaciones de células mesenquimales, identificada mediante el marcador de superficie SSEA-3 [2]. Los primeros estudios de laboratorio las describen como tolerantes al estrés y capaces de diferenciarse en varios tipos celulares en cultivo. La investigación sobre las células MUSE sigue evolucionando y la evidencia clínica en humanos continúa siendo limitada.

Consentimiento y evaluación de los donantes

La obtención responsable comienza con el donante. Un proceso documentado suele incluir:
  • Consentimiento informado para la recolección y el uso previsto.
  • Pruebas de marcadores de enfermedades infecciosas.
  • Revisión del historial del donante y de los criterios de elegibilidad.
  • Trazabilidad que vincule cada lote con su material de origen.
Estos pasos protegen a las personas donantes y proporcionan un registro documental a los usuarios posteriores. Los programas acreditados según estándares de biobancos, como ISO 20387, siguen procedimientos escritos para este tipo de trazabilidad.

Cómo se aíslan y expanden las células

El proceso desde el tejido sin procesar hasta un producto celular caracterizado suele incluir estas etapas:

  1. Procesamiento del tejido. El tejido se lava y se corta en pequeños fragmentos (método de explantes) o se descompone con una enzima, como la colagenasa (digestión enzimática).
  2. Siembra y selección. Las células se adhieren a superficies de plástico para cultivo y se elimina mediante lavado el material que no se adhiere.
  3. Expansión. Las células crecen a través de varios pases en condiciones controladas.
  4. Caracterización. Las células se analizan según criterios definidos.
  5. Criopreservación. Las células se congelan en condiciones controladas para su almacenamiento y transporte.

Métodos de explantes frente a métodos enzimáticos

El método de explantes permite que las células migren desde los fragmentos de tejido. Es suave, pero puede ser más lento. La digestión enzimática libera más células con mayor rapidez, aunque el tipo, la concentración y el tiempo de exposición a la enzima pueden afectar a la viabilidad celular y a los marcadores de superficie. Un proveedor que indique qué método utiliza ofrece un dato concreto que puedes evaluar.

Cómo se caracterizan las células

La International Society for Cellular Therapy propuso en 2006 criterios mínimos para definir las MSC [3]. Entre ellos se incluyen:

  • Adhesión al plástico en condiciones estándar de cultivo.
  • Expresión de determinados marcadores de superficie (como CD73, CD90 y CD105) y ausencia de otros (como CD45 y CD34).
  • Capacidad para diferenciarse in vitro en células óseas, grasas y cartilaginosas.

Cumplir estos criterios confirma la identidad. No demuestra que un producto funcione para ningún propósito relacionado con la salud.

De dónde provienen los exosomas

Qué son los exosomas

Los exosomas son un subtipo de vesículas extracelulares, pequeñas partículas rodeadas por una membrana que liberan las células. Transportan proteínas, lípidos y ácidos nucleicos, y los investigadores los estudian como parte de la comunicación celular [4]. En sentido estricto, el término «exosoma» se refiere a vesículas de origen endosomal. Como los métodos de aislamiento normalmente no pueden demostrar ese origen, las directrices actuales recomiendan utilizar el término más amplio «vesículas extracelulares», salvo que se haya demostrado el origen [5].

La célula productora importa

Los exosomas utilizados en investigación suelen recogerse del medio de cultivo de células cultivadas en laboratorio. El tipo de célula de origen determina la carga de las vesículas. Las vesículas procedentes de MSC del cordón umbilical no son iguales a las vesículas de células derivadas del tejido adiposo, y ambas difieren de las vesículas obtenidas del plasma sanguíneo.

Las condiciones de cultivo también importan:

  • Medios sin suero o con vesículas eliminadas: evitan que las vesículas del suero animal o humano se mezclen con la preparación.
  • Número de pases celulares: puede cambiar lo que secretan las células.
  • Niveles de oxígeno y densidad celular: pueden alterar la producción y el contenido de las vesículas.

Comparación de los métodos de aislamiento de exosomas

Ningún método es perfecto. Cada uno separa las partículas según una propiedad diferente, por lo que ofrece distintas ventajas e inconvenientes. Una encuesta mundial de investigadores encontró que la ultracentrifugación diferencial era el método más común, aunque también se utilizan habitualmente varios métodos adicionales [6].

Ultracentrifugación diferencial

  • Hace girar el líquido de cultivo a velocidades crecientes para eliminar células, residuos y vesículas más grandes; después, sedimenta las vesículas pequeñas.
  • Se utiliza ampliamente y está bien documentada [7].
  • Puede aislar conjuntamente agregados de proteínas y otras partículas; las fuerzas muy elevadas pueden dañar las vesículas o hacer que se agreguen.

Ultracentrifugación en gradiente de densidad

  • Coloca la muestra en capas dentro de un medio de densidad para que las vesículas se sedimenten según una densidad característica.
  • A menudo produce una preparación más pura que una simple sedimentación.
  • Requiere más tiempo y ofrece menos material.

Cromatografía de exclusión por tamaño (SEC)

  • Hace pasar la muestra por una columna que separa las partículas según su tamaño.
  • Tiende a preservar la estructura de las vesículas y elimina muchas proteínas libres.
  • Diluye la muestra, por lo que normalmente se realiza después una etapa de concentración.

Filtración de flujo tangencial (TFF)

  • Hace circular el líquido a través de una membrana, separando y concentrando las partículas según su tamaño.
  • Se amplía con más facilidad que la ultracentrifugación, por lo que resulta adecuada para lotes de producción más grandes.
  • Requiere un control cuidadoso del tipo de membrana, la presión y el caudal.

Kits de precipitación y captura por inmunoafinidad

    • La precipitación con polímeros es sencilla y rápida, pero puede precipitar contaminantes que no son vesículas junto con ellas.
    • La captura por inmunoafinidad utiliza anticuerpos contra proteínas de la superficie de las vesículas. Es selectiva, pero captura únicamente las vesículas que presentan el marcador elegido y puede resultar costosa a gran escala.

    Muchos laboratorios combinan dos métodos, por ejemplo, TFF seguida de SEC, para mejorar la pureza. Comparar un proceso de una sola etapa con uno de varias etapas es una de las preguntas más informativas que puedes hacer.

Qué revela el método sobre un producto

El método de aislamiento es una pista, no un veredicto. Te ayuda a formular mejores preguntas.

Preguntas que vale la pena hacer -

  • ¿Qué células produjeron las vesículas y en qué pase se encontraban?
  • ¿El medio de cultivo no contenía suero o se habían eliminado las vesículas?
  • ¿Qué método de aislamiento o combinación de métodos se utilizó?
  • ¿Cómo se midieron la concentración y el tamaño de las partículas?
  • ¿Se midieron las proteínas y los contaminantes que no eran vesículas?
  • ¿El producto final se filtró, liofilizó o criopreservó, y cómo se controló su estabilidad?

Señales de un proveedor transparente

  • Un método de aislamiento identificado, en lugar de una expresión imprecisa como «proceso patentado».
  • Recuentos de partículas acompañados de la técnica de medición, como el análisis de seguimiento de nanopartículas.
  • Resultados de pruebas de esterilidad, endotoxinas y micoplasma.
  • Documentación específica del lote que puedas cotejar con el lote que tienes.

Precaución con los recuentos de partículas

Un número elevado de partículas, por sí solo, aporta poca información. Los recuentos pueden incluir agregados de proteínas y gotas de lípidos que no son vesículas. Los investigadores llevan tiempo señalando que la pureza debe evaluarse mediante la proporción entre partículas y proteínas y varios métodos de caracterización, no mediante una única cifra destacada [8].

Cómo se caracterizan los exosomas

Las directrices de la ISEV, conocidas como MISEV, recomiendan utilizar varias pruebas complementarias en lugar de una sola [5][9]. Una preparación bien caracterizada suele incluir:

  • Tamaño y concentración de partículas: análisis de seguimiento de nanopartículas u otro método similar.
  • Marcadores proteicos: presencia de proteínas asociadas a las vesículas, como las tetraspaninas (CD9, CD63 y CD81), junto con la ausencia de marcadores de otros compartimentos celulares.
  • Morfología: microscopía electrónica para observar la forma y estructura de las partículas.
  • Indicadores de pureza: proporción entre proteínas y partículas y pruebas para detectar contaminantes que no sean vesículas.
  • Pruebas de seguridad: esterilidad, endotoxinas y micoplasma.

Sistemas de calidad y documentación

La buena ciencia depende de registros adecuados. En este ámbito se aplican varios marcos de calidad:

  • cGMP (buenas prácticas de fabricación vigentes): procedimientos escritos para la fabricación, la limpieza y el mantenimiento de registros.
  • Clasificación de sala limpia ISO 7: controla el número de partículas en suspensión en el espacio de producción.
  • ISO 20387: norma para biobancos que abarca competencia, imparcialidad y trazabilidad.
  • Métodos de esterilidad y endotoxinas de la USP: pruebas estándar para detectar contaminación microbiana y endotoxinas bacterianas.
  • Certificado de análisis (COA): informe específico de un lote que enumera las pruebas realizadas y sus resultados.

Un COA solo es útil cuando corresponde al lote que recibiste. Comprueba que el número de lote del documento coincida con el del vial y lee los resultados reales, no solo el resumen de aprobado o no aprobado.

Obtención y calidad en CellGenic

CellGenic es un proveedor exclusivo para profesionales de células, exosomas y péptidos de grado de investigación. Según la empresa, los productos se fabrican en sus propias instalaciones certificadas cGMP, con una sala limpia ISO 7, y sus operaciones de biobanco siguen la norma ISO 20387.

La empresa describe una cadena de custodia de cinco etapas que abarca la obtención, el trabajo de laboratorio, el control de calidad y cumplimiento, el embalaje y el envío. Su enfoque declarado incluye:

  • Obtención: evaluación de donantes, cualificación de materias primas y certificado de origen de los materiales de entrada.
  • Laboratorio: expansión celular y aislamiento de vesículas en las mismas instalaciones.
  • Pruebas: controles de esterilidad, endotoxinas, micoplasma, identidad y potencia, con un COA enviado con cada lote.
  • Embalaje y envío: formatos liofilizados o criopreservados, embalaje con precinto de seguridad y un registrador de temperatura en cada caja.

Puedes consultar el catálogo, que incluye MSC de gelatina de Wharton y células MUSE y productos de exosomas como ExoElite 70 y exosomas liofilizados. Los médicos cualificados, propietarios de clínicas e investigadores pueden solicitar acceso para profesionales para ver los precios y realizar pedidos. La propia página de verificación de autenticidad de CellGenic permite comprobar un producto mediante su registro de lote.

Los productos de CellGenic están destinados a profesionales verificados, y el catálogo de la empresa etiqueta los péptidos como productos destinados únicamente a la investigación. Cualquier persona que esté considerando un producto biológico debe consultarlo con un profesional sanitario cualificado.

Qué dice la investigación actual

  • Los estudios en cultivos celulares y modelos animales han investigado cómo las MSC y sus vesículas extracelulares influyen en la inflamación, las señales de reparación tisular y la comunicación celular.
  • Los resultados varían entre modelos, fuentes y métodos, una de las razones por las que es importante contar con informes estandarizados.
  • La evidencia clínica en humanos es limitada para la mayoría de las aplicaciones, y muchos ensayos son pequeños o se encuentran en etapas iniciales.
  • Los investigadores siguen trabajando para estandarizar el aislamiento y la medición de la potencia, de modo que puedan compararse los resultados de distintos laboratorios.
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Riesgos potenciales y limitaciones conocidas

  • Riesgo de contaminación: los productos biológicos pueden contener contaminación microbiana o endotoxinas si no se fabrican y analizan adecuadamente.
  • Reacciones inmunitarias: el material procedente de donantes puede provocar respuestas inmunitarias en algunas personas.
  • Variabilidad entre lotes: los materiales biológicos varían de un lote a otro, incluso en condiciones controladas.
  • Limitaciones de los métodos: actualmente, ningún método aísla con pureza completa un único subtipo de vesícula.
  • Mecanismos poco claros: los mecanismos que explican los efectos descritos no se comprenden por completo.
  • Datos a largo plazo limitados: la información sobre seguridad a largo plazo en humanos es escasa para muchos de estos productos.
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Situación regulatoria

Las normas varían según el país y el tipo de producto. En Estados Unidos, la FDA ha declarado que no ha aprobado ningún producto de exosomas para tratar enfermedades o afecciones y ha advertido sobre productos no aprobados comercializados con afirmaciones terapéuticas [10]. Los investigadores y proveedores son responsables de conocer las normas aplicables en su jurisdicción, incluidos los requisitos de cualquier vía de investigación clínica.

Cuándo consultar a un profesional sanitario

Habla con un profesional sanitario autorizado antes de considerar cualquier producto basado en células o exosomas, especialmente si:

  • Tienes una afección médica o tomas medicamentos con receta.
  • Estás embarazada o en período de lactancia.
  • Tienes antecedentes de problemas inmunitarios o autoinmunitarios.
  • No sabes si un producto es legal o adecuado en tu región.

No utilices materiales de grado de investigación como sustituto de la atención médica.

Puntos clave

  • La fuente del tejido, la evaluación del donante y las condiciones de cultivo determinan el contenido de un producto celular o de exosomas.
  • Los métodos de aislamiento difieren en pureza, rendimiento y escalabilidad, y muchos laboratorios combinan dos métodos.
  • Los recuentos de partículas por sí solos pueden inducir a error, por lo que conviene buscar varios métodos de caracterización.
  • La documentación específica del lote, incluido un COA que coincida con el lote, es una señal práctica de transparencia.
  • La evidencia clínica en humanos sigue siendo limitada y las normas regulatorias varían, por lo que es importante contar con orientación profesional.

Preguntas frecuentes

No. Los exosomas son pequeñas vesículas liberadas por las células. No son células y no pueden dividirse ni crecer por sí solos.
Depende del objetivo. La ultracentrifugación es habitual, la SEC conserva bien la estructura y la TFF se adapta bien a una producción a mayor escala. Muchos laboratorios combinan métodos.
Un COA enumera las pruebas realizadas en un lote específico, como esterilidad, endotoxinas, tamaño y concentración de partículas, junto con los resultados.
Según su sitio web, CellGenic es una plataforma exclusiva para médicos, propietarios de clínicas e investigadores, y verifica cada cuenta antes de habilitar los precios y los pedidos.
Todavía no para la mayoría de los usos. Muchos hallazgos proceden de estudios de laboratorio y en animales, y la evidencia clínica en humanos es limitada.
Este artículo tiene fines educativos únicamente y no constituye consejo médico. No diagnostica, trata ni recomienda ninguna terapia.

Referencias

  • Wang HS, Hung SC, Peng ST, et al. Células madre mesenquimales en la gelatina de Wharton del cordón umbilical humano. Stem Cells. 2004;22(7):1330-1337.
  • Kuroda Y, Kitada M, Wakao S, et al. Células multipotentes únicas en poblaciones de células mesenquimales humanas adultas. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010;107(19):8639-8643.
  • Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, et al. Criterios mínimos para definir células estromales mesenquimales multipotentes. Declaración de posición de la International Society for Cellular Therapy. Cytotherapy. 2006;8(4):315-317.
  • Kalluri R, LeBleu VS. La biología, función y aplicaciones biomédicas de los exosomas. Science. 2020;367(6478):eaau6977.
  • Théry C, Witwer KW, Aikawa E, et al. Información mínima para estudios de vesículas extracelulares 2018 (MISEV2018): declaración de posición de la International Society for Extracellular Vesicles. J Extracell Vesicles. 2018;7(1):1535750.
  • Gardiner C, Di Vizio D, Sahoo S, et al. Técnicas utilizadas para el aislamiento y la caracterización de vesículas extracelulares: resultados de una encuesta mundial. J Extracell Vesicles. 2016;5:32945.
  • Théry C, Amigorena S, Raposo G, Clayton A. Aislamiento y caracterización de exosomas de sobrenadantes de cultivos celulares y fluidos biológicos. Curr Protoc Cell Biol. 2006;Chapter 3:Unit 3.22.
  • Webber J, Clayton A. ¿Qué pureza tienen tus vesículas? J Extracell Vesicles. 2013;2:19861.
  • Welsh JA, Goberdhan DCI, O’Driscoll L, et al. Información mínima para estudios de vesículas extracelulares (MISEV2023): de enfoques básicos a avanzados. J Extracell Vesicles. 2024;13(2):e12404.
  • Administración de Alimentos y Medicamentos de Estados Unidos (FDA). Notificación de seguridad pública sobre productos de exosomas. Diciembre de 2019. https://www.fda.gov
  • CellGenic. Información sobre fabricación y calidad. https://cellgenic.com

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